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| CALUX® 生物检测法的原理 |
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CALUX® 生物检测法是利用基因转换后的细胞 Cytochrom
P450（CYP1A1）解毒酶合成基因和荧光素合成基因 (luciferase gene) 的细胞株进行检测的一种生物检测方法。 |
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二恶英类的毒性 |
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二恶英类 (PCDDs、 PCDFs、Co-PCBs) 是脂溶性的物质,因而它可穿过细胞膜进入细胞内。进入细胞之后,
环境中的芳香族二恶英类物质会与芳香烃受体 (Ah receptor)复合体产生可逆性的结合。假设将环境中的芳香族二恶英类物质比喻成钥匙, AhR
比喻成锁头的话,钥匙可将锁头 (AhR) 打开并使它产生活性。环境中的芳香族二恶英类物质与AhR 复合体结合之后, AhR
的形状会产生变化,并将它送至细胞核内。在细胞核内,被活性化的 AhR 与被称为 AhR 的核内输送蛋白质和 ARNT 形成复合体。因为 AhR-ARNT
复合体可识别特定的 DNA序列 ,并促使相同序列的 DNA 结合。这些具有特定排列的 DNA 序列被称为 XRE : Xenobaiotics
Responsive Elements (异性物质反应单位又称二恶英类反应元素) 。被活性化的 AhR-ARNT 和 XRE 结合之后, 也会使 XRE
下游的基因活化。在 AhR-ARNT 控制的下游基因中,除了Cytochrom
P450（CYP1A1）解毒酶合成基因之外还有很多种。当环境中的芳香族二恶英类物质存在时, 被活性化的 AhR-ARNT 和 XRE
在结合之后,会促使基因启动转录形成 RNA（mRNA）。RNA（mRNA）被运输至细胞核外之后在细胞质内 mRNA 经转译作用后产生Cytochrom
P450（CYP1A1）解毒酶合成基因及新的蛋白质。这个蛋白质被认为就是二恶英的毒性来源。 |
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荧光素酶的合成与二恶英类的分析 |
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CALUX® 生物检测法是使用基因转换过后的芳香烃受体（AhR）控制下的基因。这个基因可以制造象荧火虫般荧光的荧光素酶。CALUX®
生物检测法就是利用这个原理，让转换后的细胞和环境中的芳香烃二恶英类物质接触，使它增加合成 CYP1A1
蛋白质和荧光素酶蛋白质。然后测定荧光素酶的发光量之后，就可求得样品中的二恶英 TEQ 的浓度了。 |
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CALUX® Assay的原理图 |
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当环境中的芳香族二恶英类物质侵入细胞内之后，就和细胞质中的受体结合。 |
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芳香族二恶英类物质与复合受体和可以运输至核内的蛋白质 ARNT 结合。 |
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芳香族二恶英类物质/Ah受体/ARNT 的三相复合体被输送到细胞核内。 |
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三相复合体和CYP1A1基因或其他拥有XRE的基因结合，并指导合成CYP1A1酶和其他蛋白质。
（酶的诱导•细胞分裂变化•细胞分化变化）→ 癌症发生•畸形儿发生•免疫异常•发育异常） |
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④之中的 XRE 下游基因,被荧光素酶基因所转换的部分,会指导合成荧光素酶。 |
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各个基因所拥有的信息被转译成 mRNA 。 |
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利用mRNA 的信息，合成蛋白质 = 翻译。 |
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在经由④之下，CYP1A1酶和其他蛋白质被合成。 |
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在经由⑤之下，合成产生了荧光素酶，再加入荧光基质，就可测定其活性了。
（荧光素酶的发光量 → 样品中的二恶英的 TEQ 浓度 |
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